Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者实质性缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现呼吸道自身抗躯到浮现1标准型白血病流行病学病征的方面亲率在学童时期就有很好的描述，多个呼吸道自身抗躯阳性的学童中都有70%在血清转换后10年内患有白血病，而随访15年的学童这一比重缩减到84%。相对于之下，占流行病学1标准型白血病一半以上的标准型1标准型白血病的胃癌必要还没有人得到来得进一步的学术研究。

越来越多的人开始用作分期该系统来下定义1标准型白血病的方面：个躯在浮现多种呼吸道自身抗躯时转入第1阶段，浮现血糖异常时转入第2阶段，浮现病征时转入第3阶段。一些多发呼吸道自身抗躯阳性的个躯，在1期和2期，方面较慢速，并发展为胃癌的1标准型白血病。我们之前描述了一组成员在首次验证到多种呼吸道自身抗躯样本后将近10年无白血病的太快速方面者，这组成员病症多人少，但相似性极其清楚。随后，我们发现呼吸道自身特异性特异性CD8+T肝细胞催化在方面快速速的病症中都基本不假定，但在近期胃癌和仍然假定的白血病病症中都很容易验证到。这可能会说明了，与方面病症相对于，这些病症自身免疫该系统的调节增强。

早期学术研究说明了，尽管调节性T肝细胞(Treg)使用量正常，但白血病病症假定一些功能性瑕疵，其中都包括对IL-2的催化战斗能力增高。此外，白血病病症中都的震荡CD4+T肝细胞可能会对调节不具抵抗性，展现出为震荡T肝细胞的选择性减弱，自然地产生的Treg和躯外产生的选择性Treg，以及特异性经历的CD4+T肝细胞中都IL-2催化减弱。本学术研究的目的是描述了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在一小群极快速速方面者中都的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以人群为基础的纵向学术研究，在21岁以下确诊的病症亲戚中都检查1标准型白血病的险恶因素。我们之前描述了仍然快速速方面者的相似性，他们始终保持多重呼吸道自身抗躯阳性多达10年，但没有人浮现白血病的流行病学病征，慢速性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续始终保持无白血病并不想包括大量血液样本的快速速方面者归入T和B肝细胞功能性分析。在目前的学术研究中都，8名慢速方面者(SP组成员)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的呼吸道自身抗躯阳性。所有的参加者都始终始终保持1标准型白血病方面的1期，尽管一些人随后丧失了呼吸道自身抗躯对某些特异性的阳性催化，然而，一名病症不太可能会始终始终保持2期将近6年，但没有人浮现流行病学病征，一名病症被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集检验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该供躯同步进行了单独审计。分离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，引入多参数流式肝细胞术和T肝细胞选择性试验审计供躯中都Treg的频带、表标准型和功能性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无监督聚类分析，审计Treg表标准型。

结果：与肥胖症供躯相对于，来自慢速方面躯的清醒CD4+T肝细胞的监督聚类显示，激活命的清醒CD4+ Treg频带缩减，与利尿剂选择性的TNFR相关酶(GITR)表达出来缩减有关。一名HbA1c上升的病症与方面快速速者和比如说的非常少成员相对于，Treg谱有所不同。功能性分析说明了，与肥胖症供躯相对于，来自快速速方面躯的Treg抑制的CD4+震荡T肝细胞选择性相对来说受损。展现出为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134表达出来的选择性缩减。

绘出1 深入的表标准型分析显示，CD4+Treg亚标准型在慢速方面队列中都缩减。由FlowSOM生成的Treg室，群聚在来自所有供躯的活命CD4+CD45RA -肝细胞上。根据记号物表达出来鉴定出10个元簇:清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用作9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个端口代表人一个战略性(100个战略性)，来得多的元战略性(10个元战略性)在端口组成员周围上色。每个端口中都的饼绘出声称单个记号的表达出来级别。(b)每个元聚类的热绘出，以显示整躯记号表达出来。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成绘出，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的孔洞。(e-l)相对丰度为每个metacluster装有本站绘出(丰度> 0.05%)相符为HD和SP组成员:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肝细胞(l)。浅蓝色带子代表人慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 用作CITRUS的预报推测，Treg频带的缩减是方面快速速的标识。级别门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参加者和比如说的HD参加者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的不同。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的代表人性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来同步进行分离，模拟FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(白斑)组成员以及供躯SP 606(浅蓝色)中都CD25+ cd127的频带汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装有本站绘出;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来风力着色，箭头突出的簇被鉴别为SP和HD队列中间的不同。(j)装有本站绘出显示了在SP(白斑)和HD(灰点)组成员中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对丰度(比重)。(k)直方绘出显示每个簇的表标准型(深蓝色)和Treg记号相对表达出来与取材表达出来(金色);上列，磁盘Treg_3;上头一行，磁盘Treg_4。取材与所有其他簇中都记号的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检验

绘出3 与肥胖症献血者相对于，方面快速速者清醒treg的GITR缩减。每个清醒CD4+T肝细胞元簇(清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表达出来记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表达出来串联，显示直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon一组符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有供躯包括，p< 0.05(金色)供躯SP 606和比如说的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表达出来，从级别门控，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(浅蓝色)串联，显示直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组符号秩检验

绘出4 来自快速速方面的CD4+ treg肝细胞支配震荡CD4+T肝细胞的战斗能力增高。SP组成员用金色的本站和带子声称，HD组成员用黑色的本站和带子声称，浅蓝色的本站/带子声称供躯sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(应答者)被记号为CFSE, Treg按辨别的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再生肝细胞，培育出3紧接著同步进行流式肝细胞术验证。(a-d)与CD4+应答者相对应的treg培育出(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培育出。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百分比。用作阳性对照(激活命的鼓动肝细胞不含treg)计算选择性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 震荡CD4+T肝细胞对快速速方面的T肝细胞再生的选择性来得脆弱。SP组成员用金色的本站和带子声称，HD组成员用黑色的本站和带子声称，浅蓝色的本站/带子声称供躯sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel记号，treg按辨别的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再生肝细胞，培育出3紧接著同步进行流式肝细胞术(CD25反染)和肝细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培育出。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百分亲率(b)。(c,d) CD25选择性百分亲率(c)和CD134选择性百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中都的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出的事实是，来自快速速方面子的再生清醒CD4+Treg在GITR表达出来中都得到了扩展和丰富，强调了实质性学术研究Treg在1标准型白血病风险个躯中都的异质性的必要性。

注解出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28